
超微量分光光度計是一種用于檢測核酸、蛋白質等生物分子濃度的高精度儀器,具有樣品用量少、操作便捷等優點。以下是其標準使用方法:
一、使用前準備
儀器預熱
打開儀器電源,預熱15-30分鐘,確保儀器達到穩定工作狀態。
樣品準備
核酸樣品需溶解于無核酸酶的水或TE緩沖液中,濃度建議控制在2-2000 ng/μL(dsDNA)范圍內。
蛋白質樣品需根據類型(如BSA)選擇合適的緩沖液,濃度建議0.1-15 mg/mL。
樣品需充分混勻,避免氣泡或沉淀。
清潔檢測平臺
使用無塵紙或專用清潔布蘸取70%乙醇,輕輕擦拭上下檢測臂表面,確保無灰塵、指紋或殘留物。
二、操作步驟
空白調零
吸取1-2 μL空白溶液(與樣品溶劑一致)滴加至檢測平臺中央。
放下上檢測臂,點擊“Blank”鍵進行空白校準,等待儀器自動完成調零。
調零完成后,用無塵紙吸去空白溶液。
樣品檢測
吸取1-2 μL樣品滴加至檢測平臺同一位置。
放下上檢測臂,點擊“Measure”鍵開始檢測。
儀器自動顯示吸光度值(如A260、A280)、濃度及純度比值(如A260/A280)。
記錄數據后,用無塵紙吸去樣品,避免交叉污染。
連續檢測
若需檢測多個樣品,重復步驟2,每次檢測前需用無塵紙清潔檢測平臺。
三、注意事項
樣品濃度
若樣品濃度超出儀器量程,需稀釋后重新檢測,并乘以稀釋倍數計算實際濃度。
檢測環境
避免強光直射或劇烈震動,確保儀器處于水平、穩定的工作臺面。
維護保養
每次使用后清潔檢測平臺,長期不用時關閉電源。
定期校準儀器(建議每3-6個月),使用標準品驗證準確性。
避免使用有機溶劑(如丙酮)清潔儀器,以防損壞光學部件。
四、結果解讀
核酸純度:A260/A280比值在1.8-2.0之間為純度較高,低于1.8可能含蛋白質污染,高于2.0可能含RNA或酚類雜質。
蛋白質純度:A280為蛋白質主要吸收峰,需結合其他方法(如電泳)綜合判斷純度。
通過規范操作,可確保
超微量分光光度計的檢測精度和重復性,為科研實驗提供可靠數據支持。